CD133和缺氧诱导因子—1α在人脑胶质瘤中的表达及意义

【摘要】目的：探讨脑肿瘤干细胞标记物CD133、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在人脑胶质瘤中的表达情况，分析两者的关系及其意义。方法：应用免疫组化方法分析66例人脑胶质瘤中的CD133、HIF-1α的表达情况。结果：脑肿瘤干细胞标记物CD133，HIF-1α在正常脑组织中未见表达，在低级别脑胶质瘤中低表达，在高级别脑胶质瘤中高表达，各组之间表达有显著性差异（P < 0.05）。CD133表达与HIF-1α表达之间有相关性，两者呈正相关（ P < 0.05）。结论：CD133和HIF-1α表达呈正相关性，两者与人脑胶质瘤的病理分级呈正相关。

【关键词】CD133；缺氧诱导因子-1α；胶质瘤 ；免疫组化

【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2013）02-0001-03

人脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，易复发，浸润性生长，手术、放疗、化疗等均难以根除，致其预后较差。近年来有研究表明，CD133蛋白阳性表达的肿瘤干细胞是一种具有肿瘤再生潜能的细胞，具有自我更新和多向分化的特征，是肿瘤侵袭性生长、复发及转移的根源[1]。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α， HIF-1α）是调节肿瘤细胞缺氧反应的主要转录因子，研究发现在多数恶性肿瘤均有表达，并与恶性肿瘤新生血管的生成有关[2]。本研究通过免疫组织化学的方法，检测脑肿瘤干细胞标记物CD133、HIF-1α在不同病理级别的脑胶质瘤中的表达情况。探讨人脑胶质瘤中CD133、HIF-1α蛋白的表达在肿瘤的侵袭性生长、复发及转移中的作用，为判断预后提供临床指导，并为胶质瘤的侵袭性生长、复发及转移机制的研究提供帮助。

1 资料与方法

1.1病例资料： 研究对象为河北省沧州中西医结合医院神经外科2005 年5月～2011 年6 月住院手术切除且保存完好的胶质瘤组织的石蜡包埋标本，临床资料完整，男性36例，女性30例，脑胶质瘤组织学分析根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分级标准对其进行组织学的分类分级，其中I级10例， II级20例， III级16例、IV级20例，包括星形胶质细胞瘤42例，节细胞胶质瘤1例，脉络丛乳头状瘤5例，少突胶质细胞瘤11例，室管膜瘤5例，髓母细胞瘤2例。男38例，女28例，年龄3-64岁，中位年龄43岁。另取沧州中西医结合医院神经外科因颅脑损伤行内减压术患者8例正常脑组织作对照，所有胶质瘤患者术前均未接受过化疗或放疗等辅助治疗。所有标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4微米厚切片编码备用。

1.2 主要试剂： 兔抗人CD133单克隆抗体（浓缩型）购自博士德公司，鼠抗人HIF-1α抗体（浓缩型）购自北京中杉生物技术有限公司， SP免疫组化染色试剂盒购自河北博海生物公司，DAB试剂盒、PBS缓冲液和柠檬酸盐抗原修复液，均购自北京中杉生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色： 石蜡切片常规脱蜡水化，蒸馏水漂洗3min，切片置0.01mol/L，枸橼酸缓冲液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20min）进行抗原修复，自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温。取出切片，蒸馏水冲洗两次，每次3min，用0.01 mol/LPBS液冲洗2次共5min。使用3%双氧水阻断灭活内源性过氧化物酶，CD133一抗稀释度为1：200，HIF-1α一抗稀释度1：150，按照试剂盒说明进行操作（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照），甩去PBS液，每张片滴加2滴新配制的DAB溶液（按说明书配制），3-5min后显微镜下观察显色情况。蒸馏水充分冲洗，苏木精轻度复染1min，常规脱水，透明，干燥，封片。

1.4 结果判定： CD133染色阳性标准：以细胞膜中出现突出于背景的棕黄色颗粒为阳性。HIF-1α染色阳性标准：以细胞核中出现浅黄色、棕色、棕褐色颗粒为阳性。低倍和高倍镜下观察并在高倍镜（400X）下随机选择5个视野，计算出阳性细胞所占的百分率。结果判定标准：（-）：肿瘤组织完全不着色；（+）阳性细胞数小于25%；（++）：肿瘤组织阳性细胞数25%—50%；阳性（+++）：肿瘤组织阳性细胞数51%—75%；强阳性（++++）：肿瘤组织阳性数大于75%。分别计分为0、1、2、3、4分。

1.5 统计学方法： 全部实验数据均采用SPSS17.0统计软件分析处理。根据比较对象的不同，分别使用χ2 检验和Sperman相关性分析等方法。各组间两两比较使用非参数检验。

2 结果