罗氏电化学发光免疫法在梅毒螺旋体特异性抗体检验中的应用价值

[摘要] 目的 探讨在梅毒螺旋体（TP）特异性抗体检验中罗氏电化学发光免疫法的应用价值。 方法 方便选取医院2016年2月—2017年9月收治的240例高危TP特异性抗体阳性患者的临床资料进行回顾性分析，均采用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）进行检验，并利用罗氏电化学发光免疫法检测TP特异性抗体。评价罗氏电化学发光免疫法的临床应用价值。 结果 240例患者中经证实共有51例TP特异性抗体阳性，阳性率为21.25%；在51例证实TP特异性抗体阳性患者中罗氏电化学发光免疫法检测50例阳性；在189例经证实TP特异性抗体阴性受检者中罗氏电化学发光免疫法检测187例阴性，符合率为98.75%，灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为98.04%、98.94%、96.15%和99.47%。 结论 对TP特异性抗体检验中罗氏电化学发光免疫法准确度、灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值均理想，临床应用的价值较高。

[关键词] 罗氏电化学发光免疫法；梅毒螺旋体；特异性抗体

[中图分类号] R446.6；R759.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）08（a）-0182-03

Application of Roche Electrochemiluminescence Immunoassay in the Examination of Treponema pallidum-Specific Antibodies

LIU Xiao-hua

Emergency Department， Third People"s Hospital of Jinan， Jinan， Shandong Province， 250132 China

[Abstract] Objective To evaluate the value of Roche electrochemiluminescence immunoassay in the detection of specific antibodies against Treponema pallidum （TP）. Methods The clinical data of 240 cases of high-risk TP-specific antibody positive patients admitted from February 2016 to September 2017 in the hospital were convenient selected and retrospectively analyzed using the toluidine red unheated serum test （TRUST） and rapid plasma renin card test （RPR） and the Treponema pallidum hemagglutination test （TPHA） were performed and Roche-specific electrochemiluminescence immunoassay was used to detect TP-specific antibodies. To evaluate the clinical application value of Roche electrochemiluminescence immunoassay. Results A total of 51 cases of TP-specific antibodies were confirmed in 240 patients， with a positive rate of 21.25%； 50 cases were positive for TP-specific antibodies in 51 cases； Roche electrochemiluminescence immunoassay tested 50 cases positive； 189 cases were confirmed TP Among 187 patients with specific antibody negative test， 187 cases were negative by Roche electrochemiluminescence immunoassay， the coincidence rate was 98.75%， and the sensitivity， specificity， positive， and negative predictive values were 98.04%， 98.94%， 96.15%， and 99.47%， respectively. Conclusion The accuracy， sensitivity， specificity， positive and negative predictive value of Roche electrochemiluminescence immunoassay in the detection of TP-specific antibodies are all satisfactory， and the value of clinical application is high.

[Key words] Roche electrochemiluminescence immunoassay； Treponema pallidum； Specific antibodies

梅毒螺旋體（TP）是性传播疾病梅毒的病原体，又被称为苍白螺旋体。梅毒属于广泛流行的性病之一，在我国的发病率有所回升，且对人类健康的危害十分严重。在梅毒发生的初期，TP侵入皮肤黏膜大约3周后，局部可出现无痛性硬结及溃疡，溃疡渗出物的传染性极强，其中含有大量的TP；在梅毒中期，患者以全身皮肤黏膜梅毒疹、淋巴结肿大，亦或累及骨、关节、眼部甚至是其它器官等为主要临床症状；在梅毒晚期，皮肤黏膜将会出现溃疡性损害，内脏器官也将会出现肉芽肿样病变，甚至继发神经中枢系统损害。因此必须加强对梅毒的预防工作，才能保证降低梅毒发病率，并且在TP感染后应当尽早确诊并给予高效的控制，才能尽可能减轻对人类的危害。人类感染TP后，血清中将会产生一种抗体，是当前临床上常用的TP感染标志物[1]。但是目前临床上常用的TP特异性检验方法操作复杂，且需要严格把控实验室条件，亟待改进[2]。鉴于此，该研究特回顾性分析2016年2月—2017年9月收治的240例高危受检者的临床资料，以探讨罗氏电化学发光免疫法在TP特异性抗体检测中的应用成效和价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取医院收治的240例高危TP特异性抗体阳性患者的临床资料进行回顾性分析，纳入标准：均采用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）进行检验；均利用罗氏电化学发光免疫法检验；均有完整、清晰的检验结果记录；排除标准：检验结果可疑但是未明确者；依从性检查者；患者信息填写错误或者字迹不清者。240例患者中共有男性107例、女性133例，年龄18～75岁，平均（38.7±10.6）岁。该次研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

TRUST检验方法：分别吸取50 μL的受检者和阳性对照血清及待检测血清均匀铺入卡片3个圆圈中，用专用针头吸取抗原悬液，分别垂直滴加1滴至上述圆圈中，利用离心机处理8 min（100 r/min），水平取下卡片，3 min后肉眼观察（光线充足处），将圆圈内可见较小絮状凝聚物、中等或较大絮状凝聚物者记为阳性。

PRP检验方法：操作方法同TRUST，在强光下用肉眼观察结果，将圆圈内出现小到大的黑色凝集颗粒者记为TP特异性抗体阳性。

TPHA检验方法：采用微量血凝法检测，若在血凝板底部观察到致密的凝集块沉淀物，则记为阳性。

罗氏电化学发光免疫法检测方法：采用罗氏电化学发光免疫检测分析仪进行检测，抽取外周静脉血后离心分离获得血清，并利用重组TpN15、TpN17、TpN17抗原包被微孔板和辣根过氧化物酶标记的抗原夹心进行检测，若OD值≥Cut off值则记为阳性。

1.3 观察指标

①将血清TRUST、血浆RPR、TPHA检测结果作为“金标准”，即根据3种检测方法的结果进行判断，若是检测结果完全一致，则直接按照检测结果记录，若是检查结果不一致，由3名以上的副主任和主任医师共同讨论决定得出统一意见，若意见不一致，则交由第三方决定。统计该组患者中TP特异性抗体阳性率；②根据“金标准”，统计罗氏电化学发光免疫法检验TP特异性抗体的结果，并评估其临床应用价值，包括符合率、灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值，其中符合率=（真阳性+真阴性）/总例数×100.00%；灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100.00%；特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）×100.00%；阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）×100.00%；阴性预测值=真阴性/（假阴性+真阴性）×100.00%。

2 结果

2.1 血清TRUST、血浆RPR、TPHA检测结果

240例患者经血清TRUST、血浆RPR、TPHA检测结果发现共有51例TP特异性抗体阳性，阳性率为21.25%。

2.2 羅氏电化学发光免疫法检验结果

罗氏电化学发光免疫法检验结果中显示TP特异性抗体阳性52例，阴性188例，其中在51例证实TP特异性抗体阳性患者中罗氏电化学发光免疫法检测50例阳性；在189例经证实TP特异性抗体阴性受检者中罗氏电化学发光免疫法检测187例阴性，“四表格”统计结果见表1，临床检验价值统计结果见表2，可知该方法检验TP特异性抗体的符合率为98.75%，灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为98.04%、98.94%、96.15%和99.47%。

3 讨论

在自然情况下人类是TP唯一的传染源。一旦感染TP，将会增加梅毒的发生风险，而梅毒患者主要表现出皮肤、黏膜溃烂，扁平湿疣等症状，与之接触后可直接传染TP[3]。TP主要的传播途径是性接触，构成比约为95%，若发展为梅毒，则临床控制的难度将会显著升高，因此需要探讨理想的诊断方案。在TRUST检测过程中操作复杂且灵敏度和特异度均不甚理想；在RPR检测中主要是通过测定血清中的反应素水平观察黑色凝集情况进行判定的；TPHA是利用抗原包被经过鞣化和醛化的红细胞并通过与特异性抗体结合形成黑色凝集块沉淀判断TP的感染情况，操作复杂、繁琐，并且均需要肉眼判断凝集块的形成情况，但是对于TP特异性抗体弱阳性的患者容易出现误诊[4-5]。

罗氏电化学发光免疫法诊断TP特异性抗体的原理是将TpN15、TpN17、TpN17重组的抗原用生物素进行标记，同时利用钌复合物标记，与标本的抗体发生反应后形成夹心免疫复合物，然后通过链霉亲和素包被的微粒发挥放大和洗涤的作用，将结合在固相载体上的复合物留下后可以利用电极下化学发光反应了解相对RLUs信号强弱，进而准确反映出抗体的水平。当人类感染TP后血清将会产生两种抗体，其一是非特异性抗体，即患者血清中的抗脂质抗体，又称为反应素；另一种为抗密螺旋体的特异性抗体，特异性抗体大多在TP潜伏期（即感染后2周内）产生，能够利用很多方法检测，最为常用的是酶联免疫吸附试验、TP明胶颗粒凝集试验等，罗氏电化学发光免疫法是近年来挖掘的一种新方法，在利用该方法对TP特异性抗体水平进行检测时结果更为精准，且不需要繁多复杂的步骤，其中最为明显的优势是该方法不需要通过肉眼判断黑色絮状物、凝集块或者凝集块沉淀的发生情况。既往研究认为[6]，利用罗氏电化学发光免疫法检验TP特异性抗体仅需要10 μL血清和18 min时间便能够得出定性检测结果，准确率高，灵敏度和特异度均比较理想。此外，在利用罗氏电化学发光免疫法诊断TP特异性抗体的同时还能够检测出受检者免疫球蛋白的水平，了解其体液免疫能力，并且也可为临床治疗方案的选择提供依据[7]。该研究结果中，罗氏电化学发光免疫法检测TP特异性抗体的符合率高达98.75%，且灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值均比较高，分别为98.04%、98.94%、96.15%和99.47%，在刘洋等人[8]的研究结果中，罗氏电化学发光免疫法检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为100.00%、83.33%、96.43%和100.00%，总符合率分别为92.42%，与该研究结果相近，共同证实该方法具有较高的临床应用价值。

综上所述，建议在TP特异性抗体检验中推广应用罗氏电化学法发光免疫法，价值较高，且操作方面，能够为临床治疗方案的选择提供依据。

[参考文献]

[1] 褚雪莲， 王婷婷， 张松照. 罗氏电化学发光免疫法检测梅毒特异性抗体的应用价值[J].预防医学， 2016，28（4）：430-432.

[2] 门守山， 商发奎， 韩春花，等. 化学发光法与酶联免疫吸附试验检测献血者梅毒螺旋体特异性抗体结果分析[J].中国实验血液学杂志， 2017， 25（1）：226-230.

[3] 李彩霞， 田晓燕， 吴金锁，等. 电化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床评价[J].中国卫生检验杂志， 2017，27（23）：3391-3392.

[4] 黄妩姣， 李思， 黄宪章，等. 罗氏Cobas e601检测梅毒螺旋体抗体的方法学性能评价[J].中华生物医学工程杂志， 2016， 22（4）：249-251.

[5] 陈兰兰， 邵婧， 刘义庆，等. 两种梅毒血清学检测方法敏感度和特异度比较[J].中国医药， 2017， 12（4）：606-609.

[6] 雷建梅， 刘爱胜， 姚伟. 罗氏E601电化学发光分析仪检测FA、SF和VitB12性能评价[J].医疗卫生装备， 2016， 37（11）：105-107.

[7] 唐红辉. 国产和进口化学发光免疫分析系统检测血清ProGRP的比对分析[J].标记免疫分析与临床， 2016， 23（8）：938-941.

[8] 刘洋， 梅迪， 申爽. 电化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用研究[J].中国微生态学杂志， 2017， 29（2）：204-206.

（收稿日期：2018-05-04）