原研药多西他赛特点及仿制药与其差距

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摘 要 静脉注射剂是直接进入人体的药物，需要高标准的生产与质量管理。国产仿制品的生产工艺及质量，同欧美原研产品比较可能还存在着一定的区别。本研究从一个广泛使用的肿瘤治疗注射药物多西他赛原研及其仿制品的微胶束特性比较的研究解析出发。建议在具有微胶束体系的肿瘤治疗注射剂药学等效性研究中进一步开展微胶束直径及有抗肿瘤活性游离药物比例系数的一致性比较。由于这些特性差异可能会对药物的药效和安全性产生差异，建议开展更多的临床研究和上市后监测。

关键词 仿制药 注射用胶束制剂 药品质量

中图分类号：R927.11； R979.19 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2019）15-0085-04

Characteristics of originator docetaxel and the gap between generic and originator drugs*

HUANG Zhongyi1**， NI Ping2**

（1. the GCP Office， the Central Hospital of Jing’an District， Shanghai 200040， China； 2. Montpellier CMC Lab， Rond-Point René Char 34080， France）

ABSTRACT Intravenous injectable drugs are those that enter the body directly and require high standards of production and quality management. The production process and quality of domestic generic drugs may be different from that of the originator produced in Europa and America. This paper presents an analytical study of a widely used neoplastic injectable drug， docetaxel， and its complex micelle characteristics. To evaluate pharmaceutical equivalence， further studies are recommended for neoplastic injectable drugs using micelle system regarding micelle size and active anti-tumor free drug fraction. Since the identified differences in characteristics may lead to difference in the efficacy and potential safety risks， more clinical studies and post-marketing surveillance are recommended.

KEy WORDS generic drug； injection micelle preparation； drug quality

仿制藥，相对于原研药而言，价格低，可及性高，是临床治疗疾病的重要基础。国家食品药品监督管理总局（ CFDA） 于2013 年2 月发布了《国家食品药品监督管理局关于开展仿制药质量一致性评价工作的通知》[1]，《通知》中明确指出，仿制药是与被仿制药具有相同的活性成分、剂型、给药途径和治疗作用的替代药品，具有降低医疗支出，提高药品可及性，提升医疗服务水平等重要经济和社会效益。国家开展与实施仿制药品一致性评价工作，可以提高仿制药质量，有效地推动我国医药产品质量和医药工业发展，对保障人民健康和用药安全有极大的意义[2]。

2017年，中国国家癌症中心发布了最新一期的全国肿瘤登记中心数据，全国恶性肿瘤新发病例数380.4万例，平均每天超过1万人次患者被确诊为癌症。如此庞大的患者群存在着巨大的药物治疗诉求，药品的质量将直接关乎百万肿瘤患者的生命延长及生活质量。因此，肿瘤用仿制药的一致性评价工作尤其需要引起重视。

微胶束（micelles）是指药物溶解或分散在成球材料中，形成骨架型微小球或类球形微粒，与普通剂型相比，可提高药物的稳定性、缓控释、靶向给药等特点，广泛用于各类肿瘤药物中[3]。参照EMA（欧盟药品局）的相关技术要求，使用微胶束技术的仿制药的上市申请不适用生物等效性实验豁免，需要提供额外测试证据，包括对给药后沉淀风险的评估。具体需要提交：①分散微胶束的平均大小和分布数据；②对微胶束实体浓度的估计以体现微胶束量；③有抗肿瘤活性游离药物比例系数。针对这一技术要求，我们以多西他赛为例，进行原研药和仿制药的相关指标分析，进而探讨这一技术要求的合理性。

多西他赛（多西紫杉醇，docetaxel）属于半合成类紫杉醇化合物。多年来，被广泛使用于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、头颈癌等多个肿瘤的治疗。因此，多西他赛得到国内外多个指南的高级别临床使用推荐。在肿瘤注射药物一致性评价工作中具有一定的代表性。之前的研究表明，多西他赛仿制药普遍存在着有效成分不足、杂质含量超标（>3%）的现象[4]，临床数据统计也发现，多西他赛仿制药在血液毒性、治疗中止率等指标方面比原研药偏高[5]。因此，从更多的角度进行多西他赛仿制药质量评价，对提升仿制药质量会有一定的帮助。

多西他赛本身易溶于有机溶剂，难溶于水，细胞毒性较大。在原研制作工艺中，生产企业使用聚山梨酯80（吐温80）作为辅料，增加其溶解性，吐温80与多西他赛两者形成胶束体系。该胶束体系可增加多西他赛递送及释放的稳定性。而由于吐温80-多西他赛体系中位有效剂量为18 mg/kg，中位致死剂量为30 mg/kg，根据最新FDA定义，归属于窄窗治疗药物[6]。该类药物制剂胶束稳定性对于药物质量有着至关重要的影响。在一些相关研究中，吐温80同样可能带来一定的不良反应，如过敏性休克等症状[7]，因此，胶束稳定性对于降低吐温80可能带来的不良反应也会有一定的帮助。

原研多西他赛注射液赛诺菲泰索帝（SanofiAventis）、艾素（江苏恒瑞医药股份有限公司）及多帕菲（齐鲁制药有限公司）二个仿制药均为多西他赛注射液，以上注射液有效成分为多西他赛（C43H53NO14），溶剂为乙醇的灭菌水溶液，辅料主要为聚山梨酯80。注射液通过辅料聚山梨酯80产生胶束体系，该胶束体系可通过两方面进行评估：颗粒流体力学直径及游离药物比例系数。本文对多品牌及不同批次多西他赛注射液胶束进行流体力学直径及有抗肿瘤活性游离药物比例系数一致性比较。

1 材料与方法

1.1 样品与试剂

泰索帝，艾素及多帕菲均从市售购得（表1）。

实验使用生理盐水（0.9%氯化钠）；乙腈（HPLC级，Merck公司）；聚山梨酯80（HPLC级，梯希爱公司）；十水四硼酸钠及NPN（HPLC级，Sigma公司）；水采用Milli-Q系统（Millipore， Direct 16）纯化。

1.2 测试方法

1.2.1 动态光散射检测

使用Anton Paar 公司生产的Litesizer 500型动态光散射仪器进行样品分析，该仪器采用动态光散射模式，一次性塑料比色皿使用常规规格（10 mm×10 mm×45 mm），可见光区域检测样品，稀释剂参数为生理盐水参数。

1.2.2 多西他赛含量检测

使用Waters H-class UPLC及色谱柱Phenomenex（150 mm×2.1 mm，3.5 mm），波长230 nm[8]，0.2 ml/min流速，纯水纯乙腈22 min梯度模式检测多西他赛含量。

透析装置使用BBI Life Sciences生产的透析袋（截留分子量为14 kDa）。

1.2.3 聚山梨酯80胶束含量测试

使用Agilent 1200 HPLC及编织反应线圈（35 ℃）流动注射法[9]检测胶束含量。紫外光吸收波长为350 nm，发射波长为420 nm，1.5 ml/min流速，2 min 等度模式。

1.3 样品准备及处理

动态光散射法：样品溶液按照各自的说明书配制。使用注射器将多西他赛所对应的溶剂全部抽出并注射进对应的样品瓶中，轻轻上下振摇至少45 s，将混合后的药瓶室温放置5 min，用注射器吸入混合液，注入0.9%氯化钠注射液的离心管中，轻轻摇动，混合均匀，配制终浓度为1 mg/ml的样品溶液。DLS测试时稀释样品溶液至0.5 mg/ml，移取2 ml样品溶液进行溶液颗粒直径检测。每次测试的样品溶液均为新鲜配制，并须在配制后4 h内完成测试。

注意：由于辅料使用聚山梨酯80，样品溶液混匀容易产生气泡，干扰测试结果。测试应避免比色皿中有气泡。

透析测试：使用移液枪各移取1.5 ml溶剂加入装有泰索帝及艾素的样品瓶，移取3 ml溶剂加入装有多帕菲的样品瓶，轻轻上下振摇至少45 s，将混合后的药瓶室温放置5 min，用注射器吸入混合液，注入0.9%氯化钠注射液的离心管中，轻轻摇动，混合均匀。分别移取2 ml泰索帝及艾素的预混液，各加入18 ml生理盐水混匀稀释。移取4 ml多帕菲预混液，加入36 ml生理盐水混匀稀释。透析測试时将样品溶液稀释一倍，并超声处理3 min。

自制透析装置，选取比透析袋体积略大的外容器，确保透析装置内外体积比有较大差异（内体积比外体积大5倍并且液面充分接触。透析袋外部加入1 ml生理盐水，透析袋内部加入5 ml样品溶液，静置4 h，移取70 ml透析袋外部溶液检测多西他赛含量，移取70 ml透析袋内部溶液，加入270 ml生理盐水稀释，检测聚山梨酯80胶束含量。

2 结果与讨论

2.1 动态光散射法样品检测

除齐鲁样品采用方法精密度测试结果外，其余样品据平均配置两份，结果取平均值，如下：

多帕菲与泰索帝的动态光散射测试基本一致，艾素三个不同批次均与原研药品有明显差异，主要表现为出现200～1 000 nm的粒子（远大于其他产品的10～11 nm）。初步判定该粒子来自析出的多西他赛形成的微晶，存在一定的潜在风险。

2.2 游离多西他赛和胶束研究测试（透析实验法）方法验证与样品检测

各品牌样品分别制备4份装置，平衡4 h检测透析膜内聚山梨酯80胶束含量及透析袋外多西他赛含量。三种注射液均选用一个批次进行实验比较

透析结果提示，泰索帝有即刻抗肿瘤活性的游离多西他赛比例系数比仿制药高25%～67%，胶束包裹效率较高，游离吐温80可能带来的不良反应风险要低于两个仿制药注射液。

3 讨论及展望

本研究通过动态光散射及透析测试，对3个品牌及不同批次多西他赛注射液进行一致性评价，结果显示，艾素不同批次样品胶束体系稳定性均与泰索帝和多帕菲不同，主要表现为出现200～1 000 nm的微晶（远大于其他产品的10～11 nm胶束粒子）。同时，泰索帝有即刻抗肿瘤活性的游离多西他赛比例系数比艾素和多帕菲高25%到67%。

基于以上结果，多西他赛原研药与仿制药表现出了一定的差异，这种差异有可能使仿制药在临床应用中存在一定的潜在风险。因此，细化仿制药一致性评价标准非常必要。

3.1 丰富仿制药一致性评价中的评测方法

多项研究证明，即使原料和辅料相同，制药工艺所产生的误差都会影响药物效果。因此，应用多种评测方法推动仿制药一致性评价工作，可以有效的推动仿制药工艺水平的提升，进而提升我国仿制药水平。以多西他赛为例，参照EMA的相关技术要求及其对仿制多西他赛注射液的上市审批实践，多西他赛仿制药应额外需要参照以下EMA要求的微胶束组分在溶液中的重要技术特征进行评定，以保障公众用药安全：①分散胶束的平均粒径及粒径分布；②估计胶束实体浓度，以反映胶束长度和数量；③游离药物比例系数。

3.2 完善仿制药一致性评价体系

美国、日本等国家均较早开展了仿制药一致性评价工作，积累了很多宝贵的经验。借鉴国外仿制药一致性评价体系，结合国内仿制药现状，建立更为完善的仿制药一致性评价体系，保证我国仿制药医药市场安全。

3.3 完善配套政策，加强过程监管

我国近些年才刚刚开始仿制药一致性评价工作，这项工作任重而道远。仿制药一致性评价工作需要合理的政策引导和监管，一方面，给予企业相应的指导和支持，保证企业顺利通过过渡期；另一方面，过程监管能够保证相应工作顺利开展，使工作有法可依，有据可循，进而保证药品安全。

参考文献

[1] 国家食品药品监督管理局关于开展仿制药质量一致性评价工作的通知[国食药监注〔2013〕34号][EB/OL].（2013-02-16）[2019-04-21]. http：//samr.cfda.gov.cn/WS01/ CL1749/78516.html.

[2] 黄仲义， 李光慧. 仿制药质量一致性评价及有关建议[J].上海医药， 2019， 40（7）： 3-5.

[3] 陆新月， 吕慧侠. 微球给药系统载体材料的研究进展[J].中国医科大学学报， 2018， 49（5）： 528-536.

[4] Vial J， Cohen M， Sassiat P， et al. Pharmaceutical quality of docetaxel generics versus originator drug product： a comparative analysis[J]. Curr Med Res Opin， 2008， 24（7）： 2019-2033.

[5] Elm’hadi C， Tanz R， Khmamouche MR， et al. Toxicities of docetaxel： original drug versus generics — a comparative study about 81 cases[J/OL]. Springer Plus， 2016， 5（1）： 732. doi： 10.1186/s40064-016-2351-x.

[6] CFR - Code of Federal Regulations Title 21， Bioavailability and Bioequivalence Requirements[EB/OL]. （2018-04-01）[2019-04-21]. https：///sites/default/files/usp_pdf/ EN/USPNF/revisions/docetaxel_injection_m3872_-_sm3.pdf.

[9] Mahler HC， Printz M， Kopf R， et al. Behaviour of polysorbate 20 during dialysis， concentration and filtration using membrane separation techniques[J]. J Pharm Sci， 2008， 97（2）： 764-774.