毒死蜱降解菌CD7的筛选与植物根际促生菌JD37的联合应用

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摘要： 筛得一株毒死蜱降解菌CD7，联合植物根际促生菌JD37，研制了一种能修复土壤的农药污染，同时促进植物生长的复合型土壤改良剂.实验结果显示：将CD7和JD37发酵液按体积比1∶1使用，可以促进植物生长，并在25 d内降解土壤中约66.43%的毒死蜱.在载体量相同情况下，蚯蚓粪比滑石粉吸附更多混合菌株.在室温贮藏一个月，活菌数为4.81×107 CFU/g；制备的复合改良剂与土壤按质量比1∶1使用时，能促进植物生长、提升土壤酶活性、增加土壤中微生物的数量.

关键词： 植物根际促生菌； 毒死蜱降解菌 CD7； 土壤改良； 筛选

中图分类号： Q 939.96 文献标志码： A 文章编号： 10005137（2017）02031108

Abstract： We screened a chlorpyrifos degrading bacteria，Burkholderiasp.CD7.Joint with plant growthpromoting rhizobacteria（PGPR） JD37 to produce a compositesoil amendment，which could restorethe pesticides polluted soil and promote plant growth.Results showed that CD7 and JD37 （at the volume ratio of 1∶1） can promote the growth of plants，and within 25 days degrade about 66.43% chlorpyrifos in the soil.Further research found that under the same conditions of carrier dosage，vermicompost can adsorbed more bacteria than talcum powder；after a month preservation at room temperature，the number of living bacterium still maintained about 4.81×107 CFU/g.Carrier and soil，at the mass ratio of 1∶1，could optimally promote plant growth，improve soil enzyme activities and increase the number of microorganisms in soil.

Key words： plant growthpromoting rhizobacteria； chlorpyrifos degrading bacteria CD7； soil amendment；screening

0 引 言

随着人口的不断增长，中国耕地资源日趋缺乏，施用化肥和农药是目前维持人口与粮食间平衡的主要手段之一[1].然而，大量使用化肥和农药会导致土壤板结、土壤酸化、地下水污染和农产品农药残留超标等问题[2].其中，较普遍使用的有机磷农药“毒死蜱”在土壤中残留时间长，使生态环境恶化[34].

植物根际微生物种类繁多且活跃，构成了植物根际特有的微生物区系.植物根际促生菌（PGPR）是一类可以自由生活在土壤或定殖于植物根际的有益菌类[5].它能影响植物对矿质营养的吸收与利用，保护植物免受不同土壤病原体的危害，从而促进植物生长.同时它还能够快速、高效地分解农药残留物，改善土壤品质[6].

本文作者在土壤中进行毒死蜱降解菌的筛选与培育，并与植物根际促生菌复配，制备了微土壤改良剂.从毒死蜱降解与促进植物生长能力方面，研究了两株菌的最佳复配比例；研究不同载体对复配菌株的吸附能力和菌株贮藏时间的影响；通过盆栽实验研究所制备的微生物土壤改良剂的施用量，为微生物土壤改良的实际应用提供参考.

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 土壤样品

筛选毒死蜱降解菌的土样采自上海市金山区廊下果蔬园艺有限公司植物根际土壤和园艺土壤.

栽培土取自上海师范大学徐汇校区植物园地表下10 cm处土壤，使用筛孔边长为1.43 mm的标准筛过筛，121 ℃下灭菌20 min，重复3次，烘干备用.

1.1.2 供试菌株

桔黄假单胞菌JD37（Pseudomonas aurantiaca JD37）由上海師范大学微生物分子生物学实验室分离、纯化、保藏.菌种保藏号：CGMCC No.1.10967.

1.1.3 供试植物

小青菜种子选用上海青（Brassicachinensis L.），购自上海白玉兰蔬菜种子有限公司.

1.1.4 培养基和材料

无机盐培养基和富集培养基，灭菌后加入经氯仿抽滤灭菌的毒死蜱，质量浓度为50 mg/L，用于毒死蜱降解菌的筛选与分离.

培养基包括：King′s B（KB）液体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基、高氏（Gause）1号培养基、马丁氏（Martin）培养基.

所有培养基使用前在121 ℃下高压灭菌20 min.

载体材料：蚯蚓粪购于南京华墨现代农业发展有限公司；滑石粉购于上海前进化学试剂厂.载体在121 ℃下灭菌30 min，重复3次，烘干备用.

1.2 实验方法

1.2.1 供试菌株的活化与毒死蜱降解菌的筛选

将-80 ℃下贮藏的JD37菌株接种于KB液体培养基，置于28 ℃下摇床振荡培养，转速为200 r/min，活化3次，接种，接种量为1%.培养20 h后，取出处于对数生长期的种子液（生物量浓度约为109 CFU/mL）接入装有50 mL KB液体培养基的容量为250 mL的三角瓶中，置于摇床，28 ℃，转速为200 r/min，震荡培养20 h制备成JD37菌悬液.