AKA、CCP、RA33、RF联合检测对类风湿关节炎的临床诊断价值

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[摘要] 目的 探讨血清抗角蛋白抗体（AKA）、抗环瓜氨酸抗体（anti-CCP）、抗RA33抗体及类风湿因子（RF）联合检测对类风湿关节炎（RA）的诊断意义。 方法 利用间接免疫荧光法检测RA组、非RA自身免疫性疾病组以及正常对照组患者血清AKA；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗CCP抗体和抗RA33抗体；免疫散射比浊法检测RF因子。 结果 RA组中AKA、anti-CCP、抗RA33抗体、RF的阳性率分别为54.45%、81.12%、44.44%、75.56%，显著高于非RA组（5.61%、3.74%、8.41%、50.47%）及正常对照组（2.50%、2.50%、2.50%、7.50%，P<0.01）；AKA、anti-CCP、抗RA33抗体和RF联合检测诊断RA的灵敏度为100.0%，特异性为84.11%，敏感性分别高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗体的44.44%和RF的75.56%。 结论 AKA、抗CCP抗体、抗RA33抗体、RF四者联合检测有助于提高临床对RA的诊断。

[关键词] 类风湿因子；抗角蛋白抗体；抗环瓜氨酸肽抗体；抗RA33抗体；类风湿关节炎

[中图分类号] R593.22 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）20-0096-03

Diagnostic value of combined detection of AKA antibody， anti CCP antibody，anti RA33 antibody and RF for rheumatoid arthritis

WANG Ting HE Yanxia

Clinical Laboratory， the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450014， China

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of combinational test of anti-keratin antibody （AKA）， anti cyclic citrullinated peptide antibodies （anti-CCP）， anti RA33 antibody and rheumatoid factor（RF） in serum for RA （Rheumatoid Arthritis）. Methods Serum AKA was detected by indirect immunofluorescence，anti CCP antibody and anti RA33 antibody by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） and RF factor by immune scattering turbidimetric method for patients of RA case group，non RA group and normal control group. Results The positive rate of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF in RA group were 54.45%， 81.12%， 44.44%， 75.56%， which was significantly higher than that of non RA group of 5.61%， 3.74%， 8.41%， 50.47%， as well as that of control group of 2.50%， 2.50%， 2.50%， 7.50% （P<0.01）. The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 and RF was 100.0% of sensitivity and 84.11% of specificity. This sensitivity was higher than that of AKA 54.45%， anti-CCP 81.12%， anti RA33 antibodies 44.44% and 75.56% of RF. Conclusion The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF is proposed to be a valuable diagnostic tool for RA.

[Key words] Rheumatoid factor； Antikeratin antibody； Anti cyclic citrullinated peptide antibody； Anti RA33 antibody； Rheumatoid arthritis

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以对称性多关节炎为主要临床表现的异质性、系统性、自身免疫性疾病，患病率为0.18%～1.07%，30～50岁左右高发，一般女性发病率高于男性[1]。RA确切发病机制不明，可能与内分泌、代谢、营养、职业、心理和社会环境的差异、细菌和病毒感染及遗传因素等方面有关系[2，3]。从病理改变上来说是滑膜炎和由滑膜炎造成的关节软骨及骨质进行性破坏，导致关节畸形，最后发展为关节功能的丧失，如果不经过正规的治疗，大约75%的患者会在3年内出现残疾[4]。RA早期诊断及时治疗可以减少骨关节破坏，延缓病情进展，提高患者的生存质量[5]。本研究选取RA相关血清学标志物抗角蛋白抗体（anti-keratinantibody，AKA）、抗环瓜氨酸抗体（anti-cycliccitrulinated peptid，anti-CCP）、抗RA33抗体及类风湿因子（rheumatoid factor，RF），并探讨四者联合检测在诊断类风湿关节炎中的临床价值及应用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2013～2014年郑州大学第二附属医院就诊的RA患者90例，年龄18～69岁，平均（31.0±3.5）岁，男40例，女50例；非RA的自身免疫性疾病患者107例，年龄17～68岁，平均（33.5±5.9）岁，男45例，女62例。同期来院的健康体检者40例为正常对照组，年龄23～69岁，平均（33.9±8.7）岁，男21例，女19例。疾病组诊断符合2009年ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）提出的新的RA分类标准和评分系统及中华医学会风湿病学分会《风湿病学诊断和治疗指南》。正常对照组排除相关疾病，三组的性别及年龄均具可比性。本实验经郑州大学第二附属医院医学伦理学委员会批准，所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

7600全自动生化分析仪（日本日立公司）；欧蒙荧光显微镜（德国欧盟公司）；酶标仪ELX-800（美国，BIO-TEKINSTRMENT.IN）。AKA试剂为德国欧蒙公司生产的原装试剂盒，anti-CCP试剂为德国欧蒙公司生产的原装试剂盒，抗RA33抗体试剂购于德国HUMAN公司，RF试剂由德国西门子医学诊断产品有限公司生产。

1.3 检测方法

采集患者外周静脉血3 mL于无抗凝剂的普通管中，3000 r/min 离心10 min，收集血清，-20℃冰箱冻存，分批检测。AKA采用间接免疫荧光法（IIF）测定；anti-CCP采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定；抗RA33抗体采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定；RF采用免疫散射比浊法测定。所有试剂均严格按照试剂盒说明进行操作，抗AKA抗体1∶10稀释有荧光即为阳性，抗CCP抗体测定值>5 RU/mL阳性，抗RA33抗体测定值> 20 RU/mL为阳性，RF>20 IU/mL为阳性。

1.4 统计学分析

卡方检验或四格表精确检验用于两组间率的差异性比较，P<0.05为差异有统计学意义，统计软件为IBM SPSS Statistics for Mac， 22.0版本（国际商业机器公司，纽约州，美国）。

2 结果

2.1 四种抗体AKA、CCP、抗RA33抗体和RF单独检测的比较

2.1.1 AKA的比较 RA组中AKA的阳性率为54.45%，非RA组为5.61%，与正常对照组比较差异均有高度统计学意义（χ2=31.57，P<0.01；χ2=57.93，P<0.01）。见表1。AKA的敏感性为54.45%，特异性为94.39%。

表1 AKA的比较[n（%）]

注：*与RA组阳性率比较，χ2=31.57，P<0.01；**与RA组阳性率比较，χ2=57.93，P<0.01

2.1.2 CCP比较 RA组中anti-CCP的阳性率为81.12%，与正常对照组比较差异有高度统计学意义（χ2=69.79，P<0.01）；同时RA组显著高于非RA组（χ2=122.91，P<0.01）。见表2。AKA的敏感性为81.12%，特异性为96.26%。

表2 anti-CCP的比较[n（%）]

注：*与RA组阳性率比较，χ2=69.79，P<0.01；** 与RA组阳性率比较，χ2=122.91，P<0.01

2.1.3 RA33的比较 RA组中抗RA33的阳性率为44.44%，显著高于非RA组的8.41%（χ2=33.97，P<0.01），见表3。同时RA组显著高于正常对照组（χ2=22.56，P<0.01）。见表3。AKA的敏感性为44.44%，特异性为91.59%。

表3 抗RA33抗体的比较[n（%）]

注：*与RA组阳性率比较，χ2=22.56，P<0.01；**与RA组阳性率比较，χ2=33.97，P<0.01

2.1.4 RF的比较 RA组中抗RF的阳性率为75.56%，高于正常对照组（χ2=51.74，P<0.01），非RA组为50.47%，低于RA组（χ2=13.05，P<0.01）。见表4。RF的敏感性为75.56%，特异性为49.53%。

表4 RF的比较[n（%）]

注：*与RA组阳性率比较，χ2=51.74，P<0.01；** 与RA组阳性率比较，χ2=13.05，P<0.01

2.2 四种抗体AKA、CCP、抗RA33抗体和RF的联合检测

四种抗体联合检测的灵敏度为100.0%，特异性为84.11%，敏感性分别高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗体的44.44%和RF的75.56%，经过率的标准化后，差异均有高度统计学意义（χ2=54.86，P<0.01），见表5。

表5 四种抗体联合检测的比较[n（%）]

注：联合检测在RA组和非RA组阳性率比较，χ2=54.86，P<0.01；*四种抗体联合检测阳性为四种抗体检测结果中，至少一种抗体检测为阳性；**四种抗体联合检测阴性为四种抗体检测

3 讨论

我国RA的患病率0.32%～0.36%左右，是造成社会劳动力丧失的主要原因之一[6]，因此对RA 进行早期、可靠的诊断，并采取适当的治疗控制病情的发展、避免不可逆的关节损坏是十分重要的。

RF主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，是诊断RA的主要血清学指标之一[7]。RA患者RF阳性率为52%～92%，一般RF阳性者疗效差，并伴有其他并发症，如周围神经炎及动脉炎等；RF阴性者病情较轻，并发症较少，疗效较好[8]。RF阴转或含量降低，可作为评价药物疗效及病情缓解的一个指标。但因其在正常人（正常人RF多数为阴性，阳性率2%～5%，随年龄增长可呈增高趋势）及非RA的其他自身免疫疾病患者体中也可呈阳性，尤其在非RA的其他自身免疫疾病中，阳性率保持较高水平，所以临床诊断的价值有一定局限性[9]。本研究中RF在RA组的敏感性和特异性分别为75.56%和49.53%，因此RF是RA的一个敏感但不十分特异的指标。因此，对于RF检测结果，应结合临床病情和其他指标综合分析。随着以临床为导向的基础研究日益深入，越来越多的相关血清学标记物出现在学者面前，当前AKA、anti-CCP、抗RA33抗体等指标的检测越来越广泛地应用到临床当中来。

AKA能与鼠食管角质层反应，称之为抗角蛋白抗体，是抗丝集蛋白抗体之一，而且是RA的一个特异的指标。多项研究表明在RA早期检测到的抗丝集蛋白抗体是临床症状发展的标志。RA患者的晨僵时间以及关节压痛数都与AKA有关，有报道说AKA的持续阳性提示RA的预后不良[10]。本研究RA组患者AKA显著高于非RA组和对照组，表明AKA对于诊断RA具有一定价值。1998年Scheliehens发现瓜氨酸是RA病人血清中抗丝集蛋白相关抗体的共同抗原决定簇，并人工合成环丝氨酸多肽（CCP），以此为抗原建立了ELISA方法用于检测RA患者血清中的CCP抗体[11]。anti-CCP抗体与RF具有相同的灵敏度（anti-CCP抗体：80%，RF：79%），但特异性更高（anti-CCP抗体：96%～100%，RF：63%），而且抗CCP抗体的滴度还与疾病的活动度有很高的相关性，因而具有更为重要的临床意义[12]。本研究RA组患者anti-CCP显著高于其它组，而且单项检测CCP诊断RA的灵敏度最高，说明CCP可作为诊断依据之一。RA33是异质性核糖核蛋白的核心蛋白A2，与分子量33KD的核酸蛋白发生反应，因而定名为抗RA33抗体，研究发现该抗体除在RA患者中呈阳性外，在SLE和混合性结缔组织病中也有较低阳性率[13]。本研究RA组患者RA33高于其它两组，但单项检测RA33诊断RA的敏感度最低，表明RA33单项检测用于诊断RA会有较多漏检，但通过联合检测AKA、anti-CCP、抗RA33抗体和RF四个指标，能综合各自的优点，提高对RA的准确诊断，更大程度地防止漏诊和误诊，使患者得到准确和及时的治疗，减少致残率。

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（收稿日期：2015-04-20）