微生物实验室质控与食品安全

【摘 要】目的：通过参加河南省2010年疾病预防控制中心(以下简称CDC)实验室开展的食品微生物检测检验质量控制考核及质量控制评价工作，不断提升本实验室卫生微生物检验的工作质量,确保食品安全。方法：采用双盲控制法进行比对检测。结果：做出准确的检测结论，达到本次考核的目的。结论：此次质量评价工作不但提高了本实验室的微生物检测能力，同时经过和常规检测比较，进一步加快了对未知菌的鉴定时间。

【关键词】质量控制考核；双盲控制法；食品安全

【中图分类号】R 155.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004- 7484（2012）04- 0611- 02

【Abstract】Objective：In order to improve the work quality of microbiological examination and assure the food safety, we Partake the quality control and evaluation for food microbe testing organized by center for disease prevention and control of Henan Province in 2010.Methods：Comparable test according to the rule of double blind.Results： Get accurate test results,and achieve the evaluation goal. Conclusion：Ability of microbiological examination improved by this quality-control and shorten the measurement time compared with routine examination methods for unknown bacteria.

【Key words】Quality control evaluation；Double blind；Food security

“民以食为天,食以安为先”,食品安全随着由微生物危害导致的食源性疾病, 主要原因是微生物性危害。如何确保食品安全，已是广大疾控工作者面对的重要课题。食品微生物检测是应用微生物的理论和试验方法，通过不同的检测手段对食品当中的微生物性危害进行检测，为了加强这方面的工作，除了对监测措施提供有力支持以外，还要提供对食源性致病菌的鉴定技术，同时在确保检测结果的情况下缩短检测时间,尽快地为食源性疾病、食品污染等重大公共安全和卫生问题的定论提供有力依据。为此，我们参加了全省CDC的微生物实验室比对和能力验证活动，对实验室的质量进行控制。现将2010年的考核情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 质控样品：河南省CDC下发的微生物未知菌株3株，编号为7号、8号、9号

1.2 检测范围：食品卫生微生物学检验 GB4789。

1.3 检测要求：生化反应鉴定到属或种。

1.4 培养基、试剂：质控所需培养基、试剂均由北京陆桥技术有限责任公司、

郑州博赛生物技术股份有限公司、法国生物梅里埃公司提供，诊断血清使用的是兰州生物制品研究所生产，以上物品均在有效期内使用。

1.5 仪器、设备：电热恒温箱、荧光显微镜、VITEK-32全自动微生物分析仪、生物安全柜、电子天平，以上仪器均已通过校准，且在有效期内使用。

2 步骤与结果

2.1 以无菌操作方法打开3个质控样本的半固体管，用灭菌接种环分别挑取样品各接种于2管普通营养肉汤、1管3%NaCl碱性蛋白胨水，置26℃、36℃培养箱增菌18～24h。

2.2 直接染色及直接接种相关培养基平板 用灭菌接种环分别挑取样品进行涂片，经过革兰染色，其中7号为G-小杆菌，8号为G+短杆菌，9号为G-杆菌，同时，根据革兰染色结果，从半固体管内分别挑取样品接种于相关培养基平板上分别进行培养。

2.3 转种 在规定时间内将各增菌液出现均匀、混浊、有菌膜者，挑取菌液分别划线接种于相关培养基，分别放置26℃、36℃ ，18～24h培养，增菌管内澄清者转种营养琼脂平板、血琼脂平板上进行培养，若无菌生长，即排除。

2.4 菌落形态

2.4.1 7号菌：营养琼脂及血琼脂平板：菌落1-1.5mm，圆形，凸起，表面光滑，湿润，无色，半透明，边缘不齐。沙门菌显色平板：圆形，紫色，光滑，湿润。

2.4.2 8号菌：血琼脂平板：圆形,小,菌落周围有狭窄的β-溶血环。单增显色平板：圆形，菌落较小，蓝色菌落，周围有白色晕圈。

2.4.3 9号菌：营养琼脂及血琼脂平板：圆形，低凸起，无色，半透明，边缘整齐。SS平板：圆形，无色，半透明，边缘整齐，表面光滑，湿润。

2.5 染色 经染色对比，直接涂片和培养后涂片所观察到染色情况一致，将8号菌制成菌悬液，在显微镜下看到该菌出现轻微旋转样运动。

2.6 VITEK-32全自动微生物分析仪 挑取经过20h培养的已分纯的营养琼脂平板上的单个菌落在VITEK-32全自动微生物分析仪上进行分析鉴定，结果为7号：沙门氏菌属；8号：单核细胞增生性李斯特氏菌；9号：福氏志贺氏菌属。

2.7 进一步生化试验

2.7.1 7号菌 从SS平板上挑取单个可疑菌落，接种于生化培养基，36℃，培养18-24h。结果:双糖 黑色/红色；气体+；H2S+；动力+；吲哚-；尿素-；葡萄糖+；ONPG－；VP－；氰化钾－。

2.7.2 8号菌 从单增显色平板上挑取单个可疑菌落，转种在木糖、鼠李糖发酵管。选择木糖－、鼠李糖+的纯培养物，进行生化试验。结果：葡萄糖+；麦芽糖+；MR-VP +/+；甘露醇－；鼠李糖+；木糖－；七叶苷+；动力+；过氧化氢酶+。

2.7.3 9号菌 从SS平板上挑取单个可疑菌落，接种于生化培养基，36℃培养18-24h。结果：双糖 黄色/变红；气体-；H2S-；动力-；吲哚-；尿素-；葡萄糖+；MR+；VP- 。

2.8 血清学鉴定

2.8.1 7号菌：从营养平板上挑取纯培养的单个菌落做玻片凝集，结果为：盐水对照（-）、A-F多价O（+）、Hm（+）。

2.8.2 8号菌：从营养平板上挑取纯培养的单个菌落做玻片凝集，结果为：盐水对照（-）、福氏4种多价（+）、福多价（+）、福3.4（-）、福6（-）、福7（-）。

2.9 报告：根据染色、生化反应及血清学试验结果，结合VITEK-32全自动微生物分析仪分析报告7号菌为沙门菌，8号为单核细胞增生性李斯特氏菌，9号为福氏志贺菌。

2.10 结果：省CDC对此次质控样品检测结果的反馈为：结果全部正确，报告格式规范，综合结论为优秀。

3 讨论

3.1 疾控中心的实验室检验是我国严把食品安全的一个重要环节,而实验室间的对比是实验室自身进行质量控制的一种手段，也是判断和监控实验室能力的有效手段，同时，也向广大客户证实了自身所具有的技术能力。 在此次本实验室参加的质量控制考核当中，我们有许多收获，从中也发现了一些问题。

3.2 为了缩短时间，我们首先对三份待检样品进行了革兰染色，结合染色结果对样品的去向定了一个大致方位，同时进行了常规转种,培养后再一次染色，二者结果是相互吻合的。依据初染结果，我们将样品直接转种在相关培养基上，菌落形态与常规培养后的情况一样，但时间上缩短了24h。在应对突发事件中，如果能够对样品直接染色，在符合条件的情况下进行初报，不但可以为应急工作争取时间，同时能指导常规检测，避免检测工作走弯路。

3.3在未知菌株增菌方面，可用普通肉汤和选择性较强的增菌液同时培养，挑取培养物转种选择性培养基，结合直接染色结果，可大大缩短检测时间，并节省试剂,结果可用常规检测进行复核。

3.4样品在增菌培养后，如果其增菌管内液体澄清，不要轻易忽视，应用至少一种培养基进行转种，其他情况应分别用选择性较强和选择性较弱两种培养基进行鉴定，避免漏检现象出现。

3.5 单核细胞李斯特氏菌的鉴定时，其在半固体内的倒伞状形成需要较长的时间，我们穿刺多个半固体，并记录7d的生长结果，在26℃培养3d后其伞状基本形成。分析其出现时间较晚的原因可能是与半固体试剂有关，选用琼脂粉质量较好的试剂，有利于细菌生长，可使细菌的特性尽快出现，从而及时做出正确的鉴定。

3.6在整个鉴定过程中应认真填写工作日志，把标本所涉及的每一个环节都以文字的形式记录下来，若发现问题可以及时溯源，并便于从中总结经验。

3.7利用室间质量控制来考核各实验室真实的技术水平和熟练程度,可以使检验者对细菌的生长条件、菌落形态、色素产生、生长特性、营养和温度要求、染色镜检、生化反应、血清学试验等操作程序规范化，同时总结分析检测结果，从中摸索出好的经验和办法，快速、准确的完成细菌鉴定的过程，使微生物检验能够及时应对各种突发公共卫生事件，把食品安全做为一项重要的工作扎扎实实地做好。

参考文献：

[1] GB/T4789- 2003.食品卫生检验方法微生物学部分[S].

[2] GB/T4789- 2008.食品卫生微生物学检验[S].