TRPM8在口腔白斑和口腔鳞癌中的表达及意义

[摘要] 目的 研究瞬时受体电位M8（TRPM8）在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况，并分析其与口腔鳞癌临床病理特征的关系。 方法 采用免疫组织化学方法检测20例正常口腔组织、20例口腔白斑、45例口腔鳞癌组织标本中TRPM8的表达。 结果 TRPM8的染色阳性率在正常口腔黏膜组、白斑组、鳞癌组分别为5.0%、30.0%、66.7%。正常黏膜组、白斑组、鳞癌组染色阳性率差异均有统计学意义（P<0.05）。TRPM8的表达水平与肿瘤病理分级关系密切（P=0.01），而与是否有颈淋巴结转移（P=0.639）、肿瘤的T分期（P=0.320）、患者的年龄（P=1.00）、性别（P=0.815）无明显相关性。 结论 TRPM8在口腔鳞状细胞癌中的高表达表明离子通道蛋白可能在肿瘤的发生和增殖的过程中发挥了重要作用。

[关键词] TRPM8；口腔白斑；口腔鳞状细胞癌；免疫组化

[中图分类号] R739.8 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）10-28-03

鳞状细胞癌是最常见的发生于口腔黏膜的恶性肿瘤，占该部位恶性肿瘤的90%以上，严重危害人类健康[1]。口腔鳞癌的发生是多因素作用的结果，研究表明细胞内钙离子水平与肿瘤有密切的关系，当肿瘤细胞迅速增殖时，胞内钙离子浓度也随之提高，但对于钙离子如何从细胞外进入细胞内目前尚不清楚。近年来发现一种钙离子通道蛋白——瞬时受体电位（transient receptor potential，TRP）可能介导钙离子（Ca2+ ）内流，从而对肿瘤的发生发展起促进作用[2-3]。目前已发现多种TRP通道，尤其是TRPM亚家族，会参与到细胞的生存、增殖和死亡等基本生命活动中。本研究检测TRPM8蛋白在口腔正常黏膜、口腔黏膜白斑及口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况，并分析其与口腔鳞癌临床病理特征的关系，从而探索其在口腔疾病中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例来源于郑州大学第一附属医院口腔黏膜科及口腔颌面外科2010年5月～2012年5月活检或术后标本。其中，口腔正常黏膜10例，白斑20例，扁平苔藓20例，鳞癌45例，共计95例。口腔鳞状细胞癌病例按照下列标准进行选择：组织病理学诊断明确，首次接受手术治疗，术前无放化疗史，无其他口腔恶性肿瘤病史。其中男33例，女12例；年龄43～75岁；T分级：T1 17例，T2 13例，T3 9例，T4 6例；有淋巴结转移14例，无淋巴结转移31例；病理学分级：高分化20例，中、低分化25例。口腔白斑经临床检查和病理诊断后确诊纳入。正常对照组取自非肿瘤性活检标本中正常口腔黏膜上皮。

1.2 试剂与方法

兔抗人TRPM8抗体购自Abcam公司（英国），免疫组织化学染色试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片。采用免疫组织化学SP法，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

TRPM8主要表达于细胞浆，偶尔表达于细胞膜，阳性染色者呈棕黄色。高倍镜下随机选取5个视野， 每个视野计数200个细胞，染色判定标准采用半定量分析法[3]。按细胞染色有无及染色深浅评分：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按阳性细胞百分率评分：阳性细胞百分率<5%为0分，5%～25% 为1分，25%～50%为2分，50%～75%为3分，75%～100%为4分。结果取2项评分之积，≤4分为阴性，>4分为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 16.0软件行x2检验，检验水准α=0.05。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TRPM8在各组中的表达

TRPM8在口腔鳞癌组中66.7%呈强阳性表达，在口腔白斑组中30.0%呈阳性表达，而在口腔正常组织中只有5.0%呈弱阳性表达。TRPM8的在3组中阳性表达率有统计学意义（P<0.05），x2值分别为4.33、21.11、7.53，见表1，见图1～5。

2.2 TRPM8在口腔鳞状细胞癌中表达水平与临床病理资料的关系

TRPM8的表达水平与肿瘤病理分级关系密切（x2=5.98，P=0.012），在低分化的口腔鳞状细胞癌中的表达明显高于高、中分化的口腔鳞状细胞癌。与患者的年龄（x2=0.00，P=1.00）、性别（x2=0.17，P=0.734）方面无明显相关性。同时与肿瘤所处于的T分期（x2=0.14，P=0.902）及是否有颈淋巴结转移（x2=0.23，P=0.419）也无明显的相关性，见表2。

3 讨论

肿瘤的发生是一个复杂的过程，已有研究表明膜离子通道参与肿瘤的形成过程，TRP作为一种跨膜离子通道蛋白，广泛表达于哺乳动物的多种组织中，参与细胞增殖、分化、凋亡等功能，在肿瘤的发生中起着重要的作用[4-6]。实验表明

Ca2+与肿瘤关系密切， 直接参与调控肿瘤的生长、侵袭、转移和分化，而TRP被激活后可以非选择性通透包括Ca2+在内的阳离子[5，7]。TRP基因超家族分为7个不同的亚家族：TRPC、TRPM、TRPV、TRPA、TRPP、TRPML及TRPN；TRP蛋白有庞大的功能分类，对各种疾病的发生有着深远的影响[6-10]。

2001年Tsavaler[11]鉴别出一个新型的前列腺特异性基因TRPM8，之后的研究发现TRPM8分布广泛，功能众多，不仅参与冷感觉、疼痛感觉调控，血管的收缩和扩张，还参与细胞生长调控[12]，在多种原发性肿瘤中都有表达，实验证实TRPM家族成员的蛋白表达水平与某些上皮恶性肿瘤的出现和发展关系密切[13-14]。实验证明TRPM与口腔颌面部恶性肿瘤存在关联，潘娴等[15]发现TRPM8在舌鳞状细胞癌中比癌旁正常组织中的表达显著，李中连等[16]也发现TRPM亚家族在唾液腺腺样囊性癌中表达增高。

本实验结果显示TRPM8在口腔正常组织中只有5.0%呈弱阳性表达，在口腔白斑组中30.0%呈阳性表达，而在口腔鳞癌组中66.7%呈强阳性表达，并且与病理分级密切相关，在低分化的口腔鳞状细胞癌中的表达明显高于高、中分化的口腔鳞状细胞癌。本实验证明TRPM8在口腔鳞状细胞癌的发生发展中发挥的作用，并提示其可以作为检测癌前病变向癌症发生转变的重要指标。由于TRPM8有明确的激动剂和拮抗剂，因此为口腔鳞癌的治疗提供了新的思路及手段。目前TRPM8在口腔癌中的研究报道较少，今后仍需深入探索。

[参考文献]

[1] Lee JJ，Hung HC，Cheng SJ，et al.Carcinoma and dysplasia in oral leukoplakias in Taiwan：prevalence and risk factors [J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2006，101（4）：472-480.

[2] Clapham DE.TRP channels as cellular sensors[J].Nature，2003，426 （6966）：517-524.

[3]Hanano T，Hara Y，Shi J，et al.Involvement of TRPM7 in cell growth as a spontaneously activated Ca2+ entry pathway in human retinoblastoma cells[J].J Pharmacol Sci，2004，95（4）：403-419.

[4] Kunzelmann KIon. Channels and cancer[J].J Membr Biol，2005，205（3）：159-173.

[5] Bodding M.TRP proteins and cancer[J].Cell Signal，2007，19（3）：617-624.

[6] Voets T，Owsianik G，Nilius B，et al.TRPM 8[J].Handb Exp Pharm acol，2007（179）：32-44.

[7] Prevarskaya N，Zhang L，Barritt G.TRP channels in cancer[J].Biochim Biophys Acta，2007，1772（8）：937-946.

[8] Montell C.The TRP superfamily of cation channels[J].Sci STKE，2005（272）：re3.

[9] Nilius B，Owsianik G，Voets T，et al.Transient receptor potential cation channels in disease[J]. Physiol Rev，2007，87（1）：165-217.

[10] Montell C，Birnbaumer L，Flockerzi V，et al.A unified nom enclature for the super family of TRP cation channels [J].Mol Cell，2002，9（2）：229-231.

[11] Tsavaler L，Shapero MH，Morkowski S，et al.Trp-p8，a novel prostate-specific gene，is up-regulated in prostate cancer and other malignancies and shares high homology with transient receptor potential calcium channel proteins[J].Cancer Res，2001，61（9）：3760-3769.

[12] 刘杰锋.TRPM8的研究进展[J].国际病理科学与临床杂志，2010，30（3）：269-272.

[13] Thebault S，Flourakis M，Vanoverberghe K，et al.Differential role of transient receptor potential channels in Ca2+ entry and proliferation of prostate cancer epithelial cells[J].Cancer Res，2006，66（4）：2038-2047.

[14] Duncan LM，Deeds J，Hunter J，et al.Down- regulation of the novel gene melastat in correlates with potential form elanoma metastasis[J].Cancer Res，1998，58（7）：1515-1520.

[15] 潘娴，吴煜农，傅振，等.TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义[J].口腔生物医学，2010，1（3）：120-122.

[16] 李中连，江宏兵，叶金海，等.唾液腺腺样囊性癌中TRPM 的表达及意义[J].口腔医学，2008，28（12）：617-619.

（收稿日期：2013-04-16）