3味清热中药调节兔动脉粥样硬化相关因素的实验研究

摘要：目的 观察具有清热作用的葛根、黄连、决明子对兔动脉粥样硬化（AS）相关指标的调节作用。方法 将家兔按血脂水平随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、葛根组、黄连组及决明子组。空白组动物给予普通饲料，其余各组动物饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物按体质量分别给予相应剂量药物。给药12周后，测定血脂水平、血清抗氧化能力、凝血及血液流变学指标，并观察动脉斑块形成程度。结果 葛根、黄连可显著降低AS兔主动脉弓部斑块校正面积（PA/CVA）与最大斑块厚度（MPT），降低AS兔血清总胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及非高密度脂蛋白胆固醇（non-HDL-C）水平；决明子则可降低血清三酰甘油（TG）水平。葛根与决明子可降低AS兔血清丙二醛（MDA）水平，升高超氧化物歧化酶（SOD）活力。葛根、黄连与决明子均可降低AS兔血小板最大聚集率；葛根与黄连可降低低切变率全血黏度。结论 具有清热作用的葛根、黄连、决明子有较好的抑制AS形成的作用，与其降血脂、升高机体抗氧化能力、抑制血小板聚集、改善血液流变学等作用有关。

关键词：清热中药；动脉粥样硬化；脂质调节；抗氧化；血小板聚集；血液流变学；兔

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）01-0042-03

1 材料与方法

1.1 动物

日本大耳白兔，雄性，体质量1.8～2.2 kg，清洁级，北京医科大学医学部实验动物中心提供，许可证号：SCXK（京）2006- 0008。

1.2 药材

葛根、黄连、决明子，均购自北京人卫中药饮片厂。采用醇提法制备相应的提取物，提取率分别为19.22%、11.67%、3.89%，北京中研同仁堂医药研发有限公司制剂室提供。

1.3 试剂与仪器

总胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）测定试剂盒，北京中生生物工程技术公司。丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。肝素钠，国药集团化学试剂有限公司。其他试剂均为市售分析纯。

BT-300型血液流变测试仪（北京博莱特医药技术有限公司）；LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司）；Sartorious BT 124S电子精密天平[（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；切片机、包埋机、展片机、烤片机（德国Leica）；光学显微镜（日本Olympus）；半自动生化测定仪（Microlab 300，Vital Scientific Inc.）。Image-Pro Plus 6.0专业图像分析软件。

1.4 造模、分组与给药

参考文献[6]方法建立兔AS模型。兔高脂饲料配方：1%胆固醇、10%蛋黄粉、2%猪油、87%基础饲料混合制成。高脂饲料饲喂12周后形成兔AS模型。

动物适应性喂养1周，禁食12 h后，耳缘静脉采血，测定血清中CHO水平，按CHO水平随机分为6组：空白组、模型组、阿托伐他汀组（0.66 mg/kg）、葛根组（2.0 g原药材/kg）、黄连组（0.67 g原药材/kg）、决明子组（2.0 g原药材/kg），每组12只（下述实验结果中样本例数以实测值为准）。阿托伐他汀组给药剂量为人临床用药等效剂量；各中药给药组剂量为《中华人民共和国药典》（2005年版）中规定人临床用药上限剂量等效剂量的2倍。其中空白组动物给予普通饲料，其余各组动物饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物按体质量分别灌胃给予相应剂量的药物，给药容积为2 mL/kg，连续给药12周。

1.5 指标测定

1.5.2 二磷酸腺苷诱导血小板最大聚集率与全血血液流变学测定 末次给药前实验动物禁食不禁水16 h，给药后1 h，兔耳缘动脉取血，枸橼酸钠抗凝，离心制备富血小板血浆与贫血小板血浆，测定二磷酸腺苷（ADP）诱导血小板最大聚集率。全血肝素抗凝，血液流变仪测定高、中、低切变率全血黏度。

1.5.3 动脉粥样硬化斑块形成的组织学形态分析 实验结束后，处死兔，行主动脉弓根部病理取材，甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，Image-Pro Plus病理图像分析系统对主动脉病理改变进行分析，分别测定斑块面积（plaque area，PA），血管横截面积（cross section area，CVA），最大斑块厚度（maximal plaque thickness，MPT），并计算校正斑块面积（PA/CVA）=斑块面积（PA）÷血管横截面积（CVA）。

1.6 统计学方法

3 讨论

高胆固醇血症是AS病变形成的决定因素，与AS过程中的高凝状态以及氧化损伤关系密切，其中LDL是AS形成的强刺激物，而氧化型LDL（ox-LDL）或轻微修饰的LDL（mm-LDL）较单纯LDL更具致病性[7]。因此在AS病变过程中，高胆固醇是其主要致病因素，各种氧化损伤是发病的重要诱因，而且二者互相影响，加速了病情的发展[8]。故在高脂血症的治疗中，不仅要加强血脂的调节，而且应重视提升机体的抗氧化能力。

此外，血栓形成也是AS发生的重要机制之一。血小板分泌的血小板源性细胞生长因子可促进血管平滑肌细胞（SMC）迁移、增殖，在AS发展过程中起着十分重要的作用[9]。研究发现，高脂血症患者的血浆β-血小板球蛋白及血小板因子含量增加，血小板聚集性增强，表明高脂血症患者的血小板活化加强[10]。因此，降低血小板活性，抑制血栓形成，可显著降低AS的发生以及AS病变过程中血栓栓塞的风险。

AS病变易发生在动脉分支处，这一规律与该部位的解剖学和血流动力学特点有关[11]。通过改善AS患者血液流变学的相关指标，可显著降低AS病变引起的冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的发生率[12-13]。

AS的这些发病机制在中医理论中可归结为痰瘀交阻，日久蕴结成（热）毒，损伤脉络，最终形成痰瘀毒相互交夹的病理状态[14]。本研究结果表明，经过长期高脂饲料饲喂，家兔主动脉弓根部可形成明显的动脉粥样硬化斑块。模型组兔血脂相关指标CHO、LDL-C及non-HDL水平明显升高；血清脂质过氧化产物MDA含量增高，而SOD活性降低；血小板最大聚集率及血液黏度显著升高。而与模型组比较，清热类中药可以显著改善AS病理改变，其中黄连可降低斑块校正面积及最大斑块厚度，葛根则可降低斑块校正面积。在调节血脂代谢方面，葛根与黄连可降低血清CHO、LDL-C及non-HDL水平，而决明子则以降低血清TG水平为主。与模型组比较，葛根、决明子可显著提升AS兔的抗氧化能力，降低血清脂质过氧化产物MDA水平，增强SOD活性。此外，葛根、黄连、决明子均可降低血小板最大聚集率，提示三者具有抑制AS高凝状态下血小板聚集活性升高的作用；血脂的升高往往会导致血液黏度的增加，葛根、黄连可显著降低AS兔低切变率全血黏度，提示二者具有一定程度的改善微循环作用。

综上所述，葛根、黄连、决明子可通过降血脂、抗氧化、抑制血小板聚集、改善血液流变学等作用发挥其抗AS作用，显示出清热作用中药抗AS的特点。

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（收稿日期：2011-07-11，编辑：华强）